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更新时间：2024-12-12
厂商性质：代理商
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人血管生成素2（Ang-2）ELISA试剂盒
用途：人血管生成素2（Ang-2）ELISA试剂盒用于体外定量检测人血清，血浆，缓冲液或细胞培养液中的Ang-2含量,试剂盒可用于检测天然和重组的人Ang-2,此试剂盒只用于科研，不能用于诊断。
检测原理：
Ang-2试剂盒应用的是夹心法固相酶联免疫吸附分析法（ELISA）。Ang-2特异单克隆抗体被包被于微孔板上，已知Ang-2浓度的标准品和未知浓度的样品可在此反应孔中进行检测。先将Ang-2抗原和生物素标记Ang-2特异单克隆抗体同时孵育。洗涤后加入亲和素过氧化物酶，孵育后洗去未结合的酶。其后加入底物，产生颜色反应，颜色的深浅与样品中Ang-2的浓度成一定的比例关系。
试剂盒组成及配制：
试剂（2-8℃保存） | 1x96孔的配置 产品编号：#873.080.096 |
配制 |
96T微孔板 | 1 | 即用型(已包被) |
塑料板盖 | 2 | n/a |
Ang2标准品：4000pg/ml | 2瓶 | 按瓶上的说明稀释（见试剂制备，） |
标准品稀释缓冲液 | 1瓶（25ml） | 10X浓度，用纯水稀释 |
生物素标记Ang2抗体 | 1瓶(0.4ml) | 用生物素标记抗体稀释液稀释（见试剂制备） |
生物素标记抗体稀释液 | 1瓶(7ml) | 即用型 |
亲和素-HRP | 2支(5ul) | 0.5ml HRP稀释液预稀释（见试剂制备，） |
HRP稀释液 | 1瓶(23ml) | 即用型 |
洗涤缓冲液 | 1瓶(10ml) | 200x，蒸馏水稀释（见试剂制备） |
TMB | 1瓶(11ml) | 即用型 |
H2SO4终止液 | 1瓶(11ml) | 即用型 |
自备材料：
蒸馏水；加样器：10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩涡振荡器和磁力搅拌器
保存条件：
试剂盒保存于2-8度。
1X 洗脱液：配好后，2-8℃，可保存一周。
标准品稀释液：配好后，2-8℃，可保存一周。
稀释后的标准品：稀释后，立即使用，不易保存。
生物素标记抗体：配好后，立即使用，不易保存。
链亲合素-HRP:配好后，立即使用，不易保存。
样品收集，处理和保存：
1. 细胞培养上清：1000xg离心10分钟去除颗粒和聚合物。
2. 血清——操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000xg离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
3. EDTA，柠檬酸盐和肝素血浆可用于检测。1000Xg离心30分钟去除颗粒。
4. 如果样品不直接使用，将其分为小部分（250-500ul）-70℃下保存，避免反复冻融。
如果可能，不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的颗粒，检测前先离心或过滤。
注意：不要在37℃或56℃加热解冻。在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻
检测程序
使用前，将所有试剂充分混合，不要使液体产生泡沫。根据样品数量加上空白，标准品决定所需的板条，每个样品，标准品，空白和质控都应做双份。
详细步骤 | |
1 | 制备标准曲线 |
2 | 按实验方案在对应孔加入100ul标准品和样本,标准品，样本及空白孔,对照均做复孔。 |
3 | 加入50ul生物标记的Ang-2抗体到各孔 |
4 | 用塑料膜封板，室温（18-25.℃）孵育1小时。 |
5 | 去掉封板膜，按以下程序洗板： a. 吸出孔内液体。 b. 每孔加入300ul1X的洗涤缓冲液 c. 吸出孔内液体 d. 重复步骤b和c两次 |
6 | 加入100ul亲和素-HRP溶液到各孔 |
7 | 用封板膜，封板，室温（18-25.℃）孵育30min |
8 | 重复步骤5 |
9 | 加入100ul即用型TMB底物溶液至各孔 |
10 | 室温避光孵育10-15min，用铝箔包住反应板， 避免光照。 |
11 | 加入100ul H2SO4到各孔，终止反应。 |
在分光光度计中读取结果。450nm作为初始波长，620nm作为参考波长。 | |
注：制备的生物素标记抗Ang-2及亲和素-HRP应立即使用。
结果分析
以吸光度为Y轴，相应的Ang-2标准品浓度为X轴做标准曲线。样品的Ang-2含量可根据其O.D.值由标准曲线推断出来。
更多产品详情，请联系Diaclone 中国区总代理北京博蕾德生物科技有限公司。
