免疫组化显色试剂盒（强烈推荐）

免疫组化显色试剂盒

简介：

Santa 公司免疫组化染色ABC kit 适用于兔、山羊、小鼠、大鼠来源的一抗冰冻切片或石蜡切片显色，一个盒子足够染200张切片。

产品信息：

试剂盒组成：(以ImmunoCruzT^M mouse ABC Staining System 为例)

1. 1ml正常封闭血清
2. 250ug 生物素标记的二抗
3. 0.5ml亲和素标记HRP（AB试剂）
4. 1ml 50X过氧化物酶底物
5. 1ml 50X DAB显色液
6. 3ml 10 X底物缓冲液
7. 用于工作液制备的小瓶

客户需自备的试剂：

1. PBS缓冲液
2. 0.1-1%双氧水，溶于PBS、双蒸水或甲醇
3. 一抗
4. 样品固定试剂
5. 复染试剂（可选的）
6. 封片剂

操作流程：

所有步骤均在室温操作，用足够的试剂浸润切片，一般100ul足够或1-3滴工作液，避免在操作过程中样本变干。

1. （可选步骤）切片制备好以后，切片需用0.1-1%的过氧化氢（溶于PBS，去离子水或甲醇）孵育5-10min，以去除内源性过氧化物酶活性。用PBS冲洗两次，5min/次
2. （可选步骤）切片用1.5%封闭血清（溶于PBS）孵育1h,如果没有出现非特异性染色，该步骤可省略。
3. 切片用一抗室温孵育30min或4℃孵育overnight。通过滴定法确定*的一抗稀释度，推荐范围：0.5-5ug/ml，用1.5%封闭血清（溶于PBS）。PBS洗涤3次，5min/次
4. 用生物素标记的二抗孵育切片30min，二抗浓度约1ug/ml，PBS洗涤3次，5min/次
5. 用AB酶试剂，孵育切片30min, PBS洗涤3次，5min/次
6. 用过氧化物酶底物溶液1-3滴孵育切片30s-10min或直至强显色出现。如果需要的话，加入更多的过氧化物酶底物溶液，继续孵育，用去离子水洗涤5min。
7. (可选步骤) 苏木精复染5-10s，用去离子水洗涤数次。
8. （可选步骤）用酸乙醇脱色，染成蓝色，水冲洗。
9. 对于石蜡包埋组织，用以下方法脱水：a.2 x 95%10s，2x100%乙醇10s，3x二甲苯10s。去除多余的二甲苯
10. 立即加入1-2滴封片剂，盖上盖玻片，显微镜观察。